2 créditos – 30 horas teóricas
OBJETIVOS:
Introduzir os conceitos teórico-práticos sobre cromatográfica
líquida de alta eficiência e fornecer condições aos alunos para a seleção e otimização dos
parâmetros operacionais de um cromatógrafo líquido.
EMENTA:
1. Histórico e Princípios Básicos da Cromatografia
2. Parâmetros cromatográficos
3. Instrumentação
4. Fase Móvel
5. Fase estacionária: tipos de colunas cromatográficas
6. Mecanismos de Separação
7. Detector
8. Análise qualitativa e quantitativa
9. CLAE Semipreparativa
10. CLAE em fase quiral
11. Aplicações práticas
CONTEÚDO PROGRAMÁTICO:
– Princípios básicos. Considerações gerais:
(4 hs) Introdução. Aspectos históricos da Cromatografia. As classificações da Cromatografia.
– Parâmetros Cromatográficos:
(4hs) Tempo de retenção (tR); Tempo morto (to ou tm), Fator de retenção (k’ ); Fator separação
(a); Eficiência da Coluna (N) e Resolução (Rs).
– Instrumentação:
(4hs) Componentes de um cromatógrafo com fase líquida: bombas, colunas, injetores, detectores.
– Sistema de aquisição de dados:
– Fase Móvel:
(2hs) Reservatórios. Características dos solventes: polaridade, pureza e viscosidade. Preparo da
fase móvel. Propriedades dos solventes. Sistema Isocrático e Gradiente
– Fase Estacionária: tipos de Colunas
(4 hs) – Características das fases estacionárias. Diâmetro, comprimento, tamanho de partícula.
Cuidados e uso.
– Mecanismo de Separação:
(4hs) – Fase normal. Fase Reversa. Troca Iônica. Exclusão.
– Detector:
(4hs) – Características: sensibilidade, linearidade.Detector por Absorbância. Detector por
Fluorescência. Espectrômetro de massas.
– Análise Qualitativa e Quantitativa:
(4 hs) – Técnicas de identificação. Métodos de calibração. Reações de derivatização.
Normalização de área. Padrão Interno. Padrão externo. Adição de padrão.
– CLAE semipreparativa:
(2 hs) – Aplicações. Efeitos de sobrecarga. Recolhimento da amostra. Sensibilidade.
– CLAE quiral:
(2 hs) – Separação de enantiômeros. Fase estacionária quiral. Aplicações.
– Aplicações:
(2 hs) – Exemplos práticos: análise de alimento, fármacos, pesticidas, poluentes, matrizes
complexas, análises de metabólitos especiais de produtos naturais.
PROGRAMA PRÁTICO:
1. Inicialização e configuração de sistema CLAE
2. Instalação da coluna
3. Desenvolvimento de método
4. Análise Qualitativa
5. Análise Quantitativa de amostras reais. Curva de analítica
6. Parâmetros de análise (Resolução, número de pratos teóricos, eficiência, testes da
coluna).
7. Cuidado/Manutenção do sistema CLAE
BIBLIOGRAFIA:
1. Fundamentos de Cromatografia – Carol H. Collins, Gilberto L. Braga, Pierina S. Bonato –
Editora Unicamp. 2006.
2. Cromatografia-princípios básicos e técnicas afins. F.R.de Aquino Neto e D.S.S. Nunes-
Editora Interciência-2003.
3. Introduction to Modern Liquid Chromatography. Lloyd R. Snyder, Joseph J. Kirkland, and
John W. Dolan; 3a Ed., J. Wiley and Sons, 2009.
4. Cromatografia Líquida Moderna: HPLC / CLAE – Fernando Mauro Lanças- Editora Átomo
– 2009.
5. Fundamentos da Cromatografia a Líquido de Alto Desempenho – HPLC – Remolo Ciola-
Editora: Edgard Blucher- 2000.
6. Practical HPLC Method Development. Lloyd R. Snyder, Joseph J. Kirkland. Wiley-
Interscience; 2nd edition – 1997.
7. Basic Liquid Chromatography E. L. Johnson e R. S. Steevenson – Varian Associates Inc
2a Ed., 1977.
BIBLIOGRAFIA COMPLEMENTAR:
1. High-Performance Gradient Elution: The Practical Application of the Linear-Solvent-
Strength Model. Lloyd R. Snyder, John W. Dolan. Wiley-Interscience- 2006.
2. Techniques in Liquid Chromatography – Ed. G. F. Simpson – J. Wiley and Sons – 1982.
3. Practical High-Performance Liquid Chromatography, Veronika R. Meyer – 4th Edition –
J. Wiley and Sons – 2004.
4. Liquid Chromatography-Mass Spectrometry, Wilfried M.A. Niessen; 3a Ed. – Marcel
Dekker – 1999.
5. Periódicos Especializados.
